瑞士萬(wàn)通:離子色譜——在高效液相色譜的觸角之外。
高效液相色譜(HPLC)和離子色譜(IC)都是制藥、食品和環(huán)境等領(lǐng)域分析實(shí)驗(yàn)室的常用設(shè)備,尤其是HPLC,在一家單位中有幾十乃至幾百臺(tái)HPLC同時(shí)運(yùn)轉(zhuǎn)的情形并不少見(jiàn),IC的數(shù)量雖然比HPLC少一些,但是也經(jīng)常可以見(jiàn)到。那么二者究竟有什么異同呢?下面我們一起來(lái)看一下吧!
什么是液相色譜?
液相色譜是指對(duì)樣品中的化合物進(jìn)行分離并定量的一類(lèi)物理化學(xué)技術(shù),通常由攜帶樣品的流動(dòng)相和對(duì)樣品中化合物起到分離作用的固定相組成。現(xiàn)代液相色譜的固定相通常為粒徑在μm范圍的小顆粒,并填充到空心柱中,以分離柱的形式呈現(xiàn)。
樣品中化合物的分離取決于各組分與固定相結(jié)合能力的強(qiáng)弱。與固定相結(jié)合較強(qiáng)的,在分離柱中有更好的保留,不容易被流動(dòng)相沖出;而與固定相結(jié)合較弱的組分,則在固定相中保留較差,流動(dòng)相略微沖洗即可流出。這樣利用待分離組分與固定相結(jié)合能力的強(qiáng)弱,便可達(dá)到對(duì)樣品中化合物進(jìn)行分離的目的,然后使用不同的檢測(cè)技術(shù)便可對(duì)不同的化合物定量。
離子色譜(IC)和高效液相色譜(HPLC)是最常用的兩種液相色譜技術(shù)。對(duì)于各個(gè)行業(yè)來(lái)說(shuō),從原材料檢驗(yàn)到添加劑分析,再到最終產(chǎn)品的質(zhì)量控制,它們都是必不可少的工具。
HPLC和IC的不同之處
1分離機(jī)理不同
在HPLC中,待測(cè)物質(zhì)的分離是基于該物質(zhì)與固定相的親水相互作用(正相HPLC)或疏水相互作用(反相HPLC),因此HPLC適用于極性和非極性有機(jī)化合物的分離。其中反相HPLC的應(yīng)用較為普遍,一般使用有機(jī)溶劑作為流動(dòng)相。在IC中最常用的分離機(jī)制是離子交換,根據(jù)待測(cè)物的不同,還可以使用離子排斥和離子對(duì)兩種分離機(jī)理進(jìn)行分離。在使用離子交換機(jī)理進(jìn)行分離時(shí),待測(cè)離子與固定相表面的離子交換基團(tuán)發(fā)生交換,屬于化學(xué)反應(yīng),而不像HPLC,分離僅僅依靠物理吸附作用。而且,當(dāng)離子色譜選擇合適的色譜柱時(shí),也可以分離非離子化合物和極性化合物。
2流動(dòng)相不同
HPLC的分離是使用有機(jī)溶劑作為流動(dòng)相進(jìn)行的,通常使用梯度洗脫來(lái)獲得弱保留分析物的良好分離度并加快強(qiáng)保留分析物的洗脫。為了與流動(dòng)相混溶,通常也將樣品溶解在有機(jī)溶劑中。與HPLC相反,離子色譜法中的分離在水相中進(jìn)行,典型的流動(dòng)相一般由超純水和溶解的鹽或酸組成。絕大多數(shù)IC分離可通過(guò)等度洗脫進(jìn)行,僅有少數(shù)分離需要梯度洗脫。
3分離柱不同
IC和HPLC中的分離柱均采用基于表面改性的顆粒作為固定相,待分離的分析物與固定相發(fā)生相互作用,實(shí)現(xiàn)分離。但是二者固定相的表面官能化有所不同:IC中的固定相以陰離子或陽(yáng)離子交換基團(tuán)為特征,而HPLC則依賴(lài)于非極性(反相HPLC)或極性(正相HPLC)官能團(tuán)。此外IC與HPLC的分離柱所使用的外殼也有所不同,HPLC分離柱一般使用不銹鋼外殼,而由于IC的流動(dòng)相容易與不銹鋼發(fā)生腐蝕反應(yīng),所以IC分離柱一般采用惰性的PEEK外殼。
4檢測(cè)器不同
HPLC中使用的主要檢測(cè)器是UV檢測(cè)器。UV檢測(cè)器能夠檢測(cè)具有紫外光吸收的物質(zhì):從分離柱流出的流動(dòng)相會(huì)受到紫外線(xiàn)的照射,根據(jù)在不含樣品的流動(dòng)相和含有樣品的流動(dòng)相之間測(cè)得的吸光度差異,便可以對(duì)分析物進(jìn)行定量。而IC則主要采用電導(dǎo)檢測(cè)器,通過(guò)測(cè)量流動(dòng)相電導(dǎo)率的變化來(lái)檢測(cè)和定量分析物,靈敏度較高。
5抑制器不同
離子色譜中樣品的分離需要使用可以導(dǎo)電的鹽或酸流動(dòng)相,這樣造成電導(dǎo)檢測(cè)器檢測(cè)到的信號(hào)背景值很高,嚴(yán)重降低檢測(cè)靈敏度,此時(shí)需要使用抑制器來(lái)抑制背景信號(hào)值,詳細(xì)內(nèi)容請(qǐng)參見(jiàn)離子色譜抑制還是非抑制,可能沒(méi)你想的那么簡(jiǎn)單——陰離子篇和離子色譜抑制還是非抑制,可能沒(méi)你想的那么簡(jiǎn)單——陽(yáng)離子篇。而HPLC則不存在這個(gè)問(wèn)題,因此也不需要抑制器。