地西泮別名安定、苯并二氮卓、苯甲二氮卓，主要用于人和動物鎮(zhèn)定催眠及癲癇的治療。由于，地西泮添加到飼料中可以提高動物的生長速度和減少飼料用量，故部分養(yǎng)殖企業(yè)為謀取更多效益，在飼料中非法添加地西泮，我國農(nóng)業(yè)部與質(zhì)量監(jiān)察部門已經(jīng)嚴(yán)格禁止在飼料中添加地西泮。地西泮具有蓄毒性，在飼料中長期添加，會導(dǎo)致其在肌肉組織中富集，從而進(jìn)一步危害消費(fèi)者健康，所以建立一種高效、快速的定量流程及檢測方法尤為重要。本文使用SPE1000全自動固相萃取系統(tǒng)對飼料中的地西泮進(jìn)行固相萃取富集，用高效液相色譜儀進(jìn)行檢測。

       本文參考《T/CFIAS003-2019 飼料中地西泮的測定高效液相色譜法》采用SPE1000全自動固相萃取系統(tǒng)，測定地西泮的回收效果，實(shí)驗(yàn)證明，地西泮回收率在86.8%~99.4%之間，重現(xiàn)性RSD為5.9 %，回收率和重現(xiàn)性良好，說明SPE1000全自動固相萃取系統(tǒng)可靠、穩(wěn)定，適用于飼料中的地西泮樣品前處理。

 

       1、實(shí)驗(yàn)過程

       1.1儀器與試劑

 

       SPE1000全自動固相萃取系統(tǒng)（萊伯泰科公司）；

 

       LC600高壓高效液相色譜儀（萊伯泰科公司）；

       地西泮，1000mg/L，壇墨質(zhì)檢；

       甲醇（色譜純）；

       甲酸（分析純）；

       氨水（分析純）；

       PCX混合型陽離子交換柱，（60mg/3mL萊伯泰科）；

       實(shí)驗(yàn)用水：超純水。

 

       1.2 標(biāo)準(zhǔn)工作液的配置

       取1mL地西泮標(biāo)品于10mL容量瓶中，甲醇定容，配置成濃度為100μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液。

       取20μL 的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，用甲醇定容到1mL，配制成2 μg/mL標(biāo)準(zhǔn)工作液。

 

       1.3實(shí)驗(yàn)方法

       1.3.1 樣品制備

       將飼料樣品打碎，稱取2.0g樣品，加入400μL的標(biāo)準(zhǔn)工作液，使飼料中地西泮的加標(biāo)濃度為0.4mg/kg，加入20mL乙腈，渦旋5min，超聲20min，5000rad/min離心10min,取5mL上清液,待固相萃取處理。

       同時做樣品空白。

       1.3.2 固相萃取及濃縮

       1.3.3 HPLC測定水中地西泮

       色譜柱：C18，5μm，4.6nm*150mm；

       波    長：230nm；

       流    速：1.0mL/min ；

       進(jìn)樣量：20μL；

       流動相：甲醇：水=65:35V/V

 

       2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

       2.1  地西泮色譜圖

       2.1.1地西泮標(biāo)品色譜圖

       2.1.2飼料中地西泮加標(biāo)樣品色譜圖

       2.1.3飼料中地西泮樣品色譜圖

       2.2 HPLC測定飼料中地西泮回收率

 

       3、實(shí)驗(yàn)結(jié)論

       1、254nm和230nm的波長均可檢測到地西泮，但地西泮在230nm波長下，信號響應(yīng)最高。

       2、SPE1000全自動固相萃取系統(tǒng)凈化的樣品，其回收率和重現(xiàn)性良好，工作效率高，可應(yīng)用于此類樣品的前處理方法中。

 

       4、參考標(biāo)準(zhǔn)

       T/CFIAS003-2019飼料中地西泮的測定高效液相色譜法