地西泮別名安定、苯并二氮卓、苯甲二氮卓，是一種中樞精神系統鎮定劑，主要用于人和動物鎮定催眠及癲癇的治療。近年來，地西泮在臨床的應用越來越廣泛，此類藥物在中毒藥物中居首位，中毒和疑似中毒的病例常見，所以建立一種高效、快速的定量流程及檢測方法尤為重要。本文使用SPE1000全自動固相萃取系統對血清中的地西泮進行固相萃取、富集，用高效液相色譜儀進行檢測。

       本文參考《SPE-HPLC/MS/MS法檢測人唾液中的地西泮及其代謝產物》采用SPE1000全自動固相萃取系統，測定地西泮的回收效果，實驗證明，地西泮回收率在90.5%~98.1 %之間，重現性RSD為2.7 %，回收率和重現性良好，說明SPE1000全自動固相萃取系統可靠、穩定，適用于血液中的地西泮樣品前處理。

       1、實驗過程

       1.1儀器與試劑

       SPE1000全自動固相萃取系統（萊伯泰科公司）；

       LC600高壓高效液相色譜儀（萊伯泰科公司）；

       LC600高壓高效液相色譜儀（萊伯泰科公司）；

       地西泮，1000mg/L，壇墨質檢；

       甲醇（色譜純）；

       乙酸銨（分析純）：配制成0.2mol/L，PH=6的水溶液；

       C18固相萃取柱（60mg/3mL萊伯泰科）；

       實驗用水：超純水。

  

       1.2 標準工作液的配置

       取1mL地西泮標品于10mL容量瓶中，甲醇定容，配置成濃度為100μg/mL的標準儲備液。

取20 μL標準儲備液，用甲醇定容到1mL，配制成2μg/mL標準工作液。

 

       1.3實驗方法

       1.3.1 樣品制備

       取1mL血液，加入100 μL的標準工作液，混勻，使血樣中地西泮的加標濃度為200 μg/L，用水稀釋到5 mL，渦旋5min，5000 rad/min離心10 min。取全部上清液，待固相萃取處理。

       同時做樣品空白。

 

       1.3.2 固相萃取及濃縮

       進行SPE1000方法編輯，并加載方法到相應通道，進行樣品的固相萃取。收集洗脫液到收集瓶中，氮吹濃縮至1mL以下，用甲醇定容至1mL，待測。

 

       1.3.3 HPLC測定水中地西泮

       色譜柱：C18，5μm，4.6mm*150mm；

       波    長：230nm；

       流    速：1.0mL/min；

       進樣量：20μL；

       流動相：甲醇：水=65:35V/V

 

       2、實驗結果

       2.1  地西泮色譜圖

       2.1.2血液中地西泮加標樣品色譜圖

       2.1.3血液中地西泮樣品色譜圖

 

       2.2 HPLC測定血液中地西泮回收率

       HPLC測定血液中地西泮回收率計算結果如下表，萃取富集后的回收率在90.5%~98.1 %之間，重現性RSD為 2.7%。

 

      3、實驗結論

       1、254nm和230nm的波長均可檢測到地西泮，但地西泮在230nm波長下，信號響應最高。

       2、SPE1000全自動固相萃取系統凈化的樣品，其回收率和重現性良好，工作效率高，可應用于此類樣品的前處理方法中。

 

       4、參考標準

       SPE-HPLC/MS/MS法檢測人唾液中的地西泮及其代謝產物

       高效液相色譜法測定 地西泮中毒患者血漿與血清中地西泮濃度

       固相萃取—反相高效液相色譜法同時測定人血清中地西泮及氯硝西泮