四環(huán)素類是一類具有菲烷母核的廣譜抗生素，屬于人畜共用藥，被廣泛用于革蘭氏陽性和陰性菌感染等的防治，同時還被大量用作生長促進劑。作為應(yīng)用范圍最廣、用量最大的抗生素之一，四環(huán)素產(chǎn)生的細菌耐藥性問題已經(jīng)嚴重影響人類用藥的安全性、有效性。2022年2月1日，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部、國家市場總局、衛(wèi)健委三部門聯(lián)合發(fā)布的食品安全國家標準《GB 31656.11-2021 食品安全國家標準 水產(chǎn)品中土霉素、四環(huán)素、金霉素和多西環(huán)素殘留量的測定》已正式實施。四環(huán)素類獸藥易光解，且容易與金屬離子反應(yīng)生產(chǎn)不溶性絡(luò)合物，導(dǎo)致易吸附、峰型差等難題，在前處理和色譜分離面臨諸多挑戰(zhàn)。針對該難點項目，我們推出了最新的應(yīng)用解決方案，來一起看看！
水產(chǎn)中四環(huán)素類分析相關(guān)法規(guī)
GB 31650-2019 《食品安全國家標準 食品中獸藥最大殘留限量》中規(guī)定了魚蝦中土霉素、四環(huán)素、金霉素最大殘留限量（MRLs）200 μg/kg，強力霉素MRLs 100 μg/kg。2022年2月1日新實施的《GB 31656.11-2021 食品安全國家標準 水產(chǎn)品中土霉素、四環(huán)素、金霉素和多西環(huán)素殘留量的測定》，對《GB/T 22961-2008 河豚魚、鰻魚中土霉素、四環(huán)素、金霉素、強力霉素殘留量的測定》標準進行了更新，具體見下表。
四環(huán)素類分析難點
四環(huán)素類抗生素的基本結(jié)構(gòu)如下圖，含有ABCD四元環(huán)，D環(huán)含有酚羥基，水溶液顯酸性，容易與金屬離子形成絡(luò)合物，因此在一些未經(jīng)完全惰性化處理的玻璃瓶中會形成吸附，影響分析結(jié)果的準確性。在酸性條件下四環(huán)素、金霉素易形成可逆的差向異構(gòu)體，而金霉素在堿性、高溫（70℃）條件下易水解，同時四環(huán)素類抗生素在光照條件下也不穩(wěn)定。
因此，實驗過程中需注意：
推薦采用Na2EDTA-Mcllvaine溶液提取樣品，Na2EDTA-Mcllvaine溶液可抑制四環(huán)素與樣品基質(zhì)、玻璃容器、SPE小柱中的金屬離子螯合，提高回收率；
樣品瓶宜采用惰性化處理的玻璃瓶或PP材質(zhì)樣品瓶，SHIMSEN VIAL, 1.5mL PP短螺紋透明進樣（P/N:380-00509）；
優(yōu)先選擇內(nèi)壁帶聚合物涂層的色譜柱，例如Shim-pack GISS metal free (100*2.1mm I.D.,3um) (P/N: 227-30924-02)。
樣品前處理后盡快上機，避免長時間放置發(fā)生降解。
島津解決方案
實驗室分析儀器：島津三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用儀
出色得靈敏度
優(yōu)異的穩(wěn)定性
值得信賴的準確性
功能豐富的軟件
強大的MRM方法包
色譜柱選擇
我們比較了Shim-pack GISS（100 mm x 2.1 mm I.D., 1.9 μm）和Shim-pack GISS metal free（100 mm x 2.1 mm I.D., 1.9 μm）色譜柱，結(jié)果顯示Shim-pack GISS metal free峰形更窄，特別是金霉素和多西環(huán)素峰形更對稱，有利于提升靈敏度，且不易發(fā)生殘留。如下圖所示，以多西環(huán)素為例，其中GISS metal free的半峰寬為0.55，GISS半峰寬0.62。
標準曲線
4種四環(huán)素類抗生素在5~200 ng/mL范圍內(nèi)，線性良好，相關(guān)系數(shù)R均大于0.999。
樣品加標分析結(jié)果
對市售南美白蝦進行分析，未檢出四環(huán)素類抗生素成分，并且在出峰區(qū)域無雜峰干擾。以下是在南美白蝦樣品中添加50 μg/kg四環(huán)素得到的加標樣品MRM色譜圖，4種四環(huán)素類抗生素加標回收率70.4%~105.1%之間，符合標準要求。
結(jié)語
看了本期的獸藥分析大講堂，相信大家都了解四環(huán)素類抗生素對光照、pH敏感，容易發(fā)生降解、氧化等特點，因此分析測試過程中尤其要注意光照、pH等的影響。如果您恰好遇到了四環(huán)素類抗生素線性相關(guān)性差、有殘留等情況，不妨試試島津的應(yīng)用方案。如果您還有其他相關(guān)問題，別擔心！請持續(xù)關(guān)注島津應(yīng)用云獸藥分析大講堂系列，我們將精心挑選獸藥檢測技術(shù)的難點項目，陸續(xù)發(fā)布檢測關(guān)鍵點小貼士及解決方案，幫助大家共克食品安全檢測難關(guān)，敬請期待！
